代謝組學(xué)研究中，高通量數(shù)據(jù)批次內(nèi)和批次間存在的非生物誤差對分析結(jié)果有不可忽視的影響。今天給大家講一講，如何得到真正的高質(zhì)量代謝組學(xué)數(shù)據(jù)？
首先，樣品的檢測要持續(xù)很長時間，尤其是當(dāng)樣本量很大的時候。在檢測過程中實(shí)時地監(jiān)控儀器穩(wěn)定性、信號是否正常就十分重要。我們需要及時發(fā)現(xiàn)異常，盡早將問題排除，以保證最終采集數(shù)據(jù)的質(zhì)量！這就要求我們做好“過程質(zhì)控”。
另外，色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀是一個十分復(fù)雜精密的系統(tǒng)，隨著時間的推移會受到溫度、濕度、震動、電路板老化等客觀因素的影響，可能會導(dǎo)致一些系統(tǒng)誤差，這是不可避免的。在檢測過程中，由于人的不確定性也會引入一些誤差。這就需要我們對數(shù)據(jù)進(jìn)行“漂洗”，將噪音去除掉，做好“數(shù)據(jù)質(zhì)控”。
溫馨提醒：僅對數(shù)據(jù)做QC質(zhì)控，即對QC樣本做PCA，只是對最終結(jié)果的一個展示。而獲取“最終結(jié)果”的過程也要做質(zhì)量控制。
一、高質(zhì)量數(shù)據(jù)之過程質(zhì)控
?、賰x器穩(wěn)定性
由圖1可以看到，QC樣本TIC出峰保留時間和峰面積都重疊很好，說明儀器穩(wěn)定性很好。
圖1 正式檢測前連續(xù)檢測QC樣本TIC圖
②內(nèi)標(biāo)響應(yīng)情況
由圖2可以看到內(nèi)標(biāo)XX在樣品中的保留時間和峰面積穩(wěn)定性很好。說明儀器數(shù)據(jù)采集穩(wěn)定性很好。
圖2 內(nèi)標(biāo)XX的EIC圖
③物質(zhì)殘留情況
通過對空白樣品的檢測可以考察在檢測過程中物質(zhì)殘留情況。從圖3中可以看到空白樣品中無顯著峰檢出，說明物質(zhì)殘留控制的很好。不存在樣品間的交叉污染。
圖3 空白樣品TIC圖
二、高質(zhì)量數(shù)據(jù)之?dāng)?shù)據(jù)質(zhì)控
如果“過程質(zhì)控”是OK的，那么我們要如何來判斷實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否“可接受”呢？需要以下4條質(zhì)控來對數(shù)據(jù)進(jìn)行把關(guān):
?、貿(mào)C樣本在PCA模式識別中的分布
理論上講，QC樣本都是相同的，但是在物質(zhì)提取、檢測分析過程中會有系統(tǒng)誤差，導(dǎo)致QC樣品間會有差異。這個差異越小說明整個方法穩(wěn)定性越好數(shù)據(jù)質(zhì)量越高。體現(xiàn)在PCA分析圖上就是QC樣本的分布會聚集在一起。從圖4我們可以看到QC樣本密集分布，說明本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量很高。
圖4 PCA得分圖綠色的點(diǎn)為QC樣本，紅色的點(diǎn)為正式實(shí)驗(yàn)樣本
②QC樣本的相關(guān)性
QC樣本相關(guān)性越高（越接近于1）說明整個方法穩(wěn)定性越好數(shù)據(jù)質(zhì)量越高。從圖5我們可以看到QC樣本相關(guān)性很高，說明本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量很高。
圖5 QC樣本相關(guān)性分析
③QC樣本中內(nèi)標(biāo)響應(yīng)的穩(wěn)定性
QC樣本中內(nèi)標(biāo)為外源引入的物質(zhì)，加入的量也是相同的。所以內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)差異越小（RSD≤30%），說明系統(tǒng)越穩(wěn)定，數(shù)據(jù)質(zhì)量越高。
表1 QC樣本中內(nèi)標(biāo)檢測情況
?、躋C樣本中信號響應(yīng)穩(wěn)定的峰的占比
QC樣本中信號響應(yīng)穩(wěn)定的峰才是真正有意義的數(shù)據(jù)，那么這些穩(wěn)定峰的占比可以用來衡量數(shù)據(jù)的質(zhì)量。占比越高，說明數(shù)據(jù)的質(zhì)量越高。從表2中數(shù)據(jù)可以看到本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按照RSD≤30%篩選后的得率，無論是負(fù)離子模式還是正離子模式都需要高于70%，則說明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量很高。
表2 QC樣本RSD≤30%篩選得率
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